Друзья сайта
Контакты

Еськина Ирина
Станиславовна

тел.: 8(924)275-0110
e-mail: uork@mail.ru

Забайкальский край     г. Чита

Отбор проб для микробиологического анализа

 

Микробиологическому исследованию подвергают кожу и слизистые оболочки глаз, носа, зева, влагалища, препуция, ануса, а также раны, кровь, гной, мочу, кал, сперму, спинномозговую жидкость. 
Материал отбирают в стерильную посуду в условиях, исключающих микробное загрязнение пробы. Для выделения облигатных анаэробов материал отбирают шприцом. Желательно брать материал до начала химиотерапии и как можно скорее доставлять его в лабораторию. 
Тару, содержащую материал для анализа, маркируют с указанием его вида. 
Бактериологический анализ обычно включает микроскопию мазков-отпечатков, посев, выделение чистой культуры, идентификацию микроорганизмов по микроскопическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим признакам, а также определение чувствительности к антимикробным препаратам. Необходимо учитывать, что обнаружение на коже, слизистых оболочках, в кале микробов еще не свидетельствует о их патогенности для организма собаки. Так, в норме у собак на коже и слизистых оболочках обитают микроорганизмы родов Staphylococcus, Clostridium, Corinebacterium, Malassezia, Neisseria, Escherichia coli, Pseudomonas. В тоже время высоко патогенными могут быть Staphilococcus aureus, Streptococcus, Pseudomonas, Proteus, Klebsiella, E.coli. 
Микологический анализ включает обнаружение желто-зеленой флуоресценции грибов рода Microsporum непосредственно на коже при облучении лампой Вуда, микроскопию шерсти и других объектов, выделение грибковых культур. 

 

МОЧА

 


Мочу получают во время мочеиспускания, надавливанием на мочевой пузырь, путем катетеризации, а также с помощью пункции мочевого пузыря (уроцистоцентез). При естественном мочеиспускании и надавливании на мочевой пузырь первую, наиболее загрязненную порцию мочи, отбрасывают.
Техника катетеризации у кобелей. Используют человеческие уретральные катетеры диаметром от 1,5 до 3,5 мм. Катетеры стерилизуют, а перед введением смазывают стерильным глицерином, вазелиновым маслом, линиментом синтомицина. Самцов кладут на бок, выводят половой член из препуциального мешка, обрабатывают его раствором антисептика, легкими вращательными движениями вводят пластиковый катетер в уретру. Трудности могут возникнуть при спазме уретры, в случае большого диаметра катетера, а также во время прохождения изгиба уретры. На катетере заблаговременно отмечают предполагаемую длину уретры. Присоединенным к катетеру шприцом отсасывают мочу. Желательно затем промыть мочевой пузырь раствором фурацилина. 
Техника катетеризации у сук. Используют пластиковые или металлические катетеры, которые стерилизуют и смазывают глицерином или линиментом синтомицина. Манипуляцию проводят на стоячем животном. У суки обмывают раствором антисептика наружные половые органы, раскрывают пальцами или носовым (ушным) расширителем половые губы, в отверстие уретры легкими вращательными движениями вводят катетер, продвигают на отмеренное расстояние, отсасывают мочу шприцом, промывают мочевой пузырь раствором фурацилина. 
Техника уроцистоцентеза. Животному вводят нейролептик, укладывают на спину, фиксируют голову и конечности, пальпируют мочевой пузырь, который должен содержать достаточное количество мочи, фиксируют его с боков рукой, вкалывают иглу под углом 45 градусов к коже, направляя ее сверху вниз и от головы к хвосту. 
Конец иглы должен войти в мочевой пузырь поблизости от его перехода в уретру. Мочу отсасывают шприцом, затем вводят небольшое количество раствора фурацилина. 

 

 

НОРМАЛЬНЫЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ МОЧИ У СОБАК
(по J. Bentinck-Smith и T.W. French, с изменениями) 
 
Показатель Единицы Нормальное значения
Количество мл/кг/день 24-41
Цвет желтый
Прозрачность прозрачная
Плотность г/мл 1,015-1,050
Белок мг/л 0-300
Глюкоза 0
Кетоновые тела 0
Креатинин г/л 1-3
Амилаза ед. Сомоги 50-150
Билирубин следы
Уробилиноген следы
рН единиц 5,0-7,0
Гемоглобин 0
Эритроциты 0-единиц
Лейкоциты 0-единиц
Цилиндры 0-единиц

 


ВОЗМОЖНЫЕ ПРИЧИНЫ ОТКЛОНЕНИЯ ОТ НОРМАЛЬНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ МОЧИ

 


Количество. Повышение: гломерулонефрит, нефросклероз, амилоидоз почек, сахарный диабет, несахарный диабет, гиперадренокортицизм, пиометра, реакция на лекарственные вещества (мочегонные, глюкокортикоиды), отравления. Снижение: лептоспироз, парвовирусный энтерит, обезвоживание, отравление тяжелыми металлами, кислотами, сульфаниламидами, аминогликозидами, четыреххлористым углеродом и другими экзо и эндотоксинами, сердечная недостаточность, тромбоз и эмболия почечных сосудов, массивные кровопотери, коллапс, шок, хронический гломерулонефрит, пиелонефрит, аутоиммунные заболевания, непроходимость мочеточников. 
Цвет. В норме моча окрашена в желтый цвет. Уменьшение или исчезновение желтой окраски свидетельствует о снижении концентрации мочи в результате повышенного выделения воды (полиурия). Интенсивная желтая окраска свидетельствует о повышении концентрации мочи, например из-за обезвоживания (олигурия). Зеленую окраску моча приобретает в результате выделения билирубина. Красную окраску приобретает моча вследствие внутрисосудистого гемолиза (пироплазмоз, лептоспироз, сепсис, болезни печени, трансфузионный гемолиз, отравления, аутоиммунная гемолитическая анемия), гематурии вследствие заболеваний почек и мочевыводящих путей (травма, гломерулонефрит, пиелонефрит, опухоли, инфаркт почки, мочекаменная болезнь, паразиты в почках - диоктофимы и дирофилярии, уроцистит, уретрит, простатит), а также отравлений антикоагулянтами и других нарушений коагуляции крови, в том числе аутоиммунной тромбоцитопенической пурпуры. Выделение с мочой сгустков крови свидетельствует о сильном кровотечении. От гематурии следует отличать уретроррагию, когда кровь выделяется из уретры вне зависимости от мочеиспускания, и кровотечение из влагалища. Красная моча может быть вследствие поедании свеклы и некоторых других кормов, содержащих растительные пигменты. Окраска мочи меняется после приема отдельных медикаментов (нитрофураны, витамины). 
Прозрачность. В норме моча прозрачная. Мутная моча бывает при выделении бактерий, лейкоцитов, эритроцитов, эпителиальных клеток, солей, жира и слизи. Мутность, исчезающая при нагревании мочи в пробирке, возможно, вызвана уратами. Если муть после нагревания не исчезает, то в пробирку добавляют несколько капель уксусной кислоты. Исчезновение мути свидетельствует о присутствии фосфатов. Если муть исчезла после добавления нескольких капель соляной кислоты, это может означать присутствие оксалата кальция. 
Муть, вызванная капельками жира, исчезает после взбалтывания мочи со смесью спирта и эфира. 
Плотность. Повышение: олигурия, глюкозурия, протеинурия. 
Понижение: полиурия. 
Белок. Повышение (протеинурия): болезни почек, гемолиз, мясная диета, цистит. 
Глюкоза. Обнаружение: сахарный диабет, гипертиреоз, гиперадренокортицизм, болезни почек, введение глюкокортикоидов, стресс. 
Кетоновые тела (ацетон, бета-оксимасляная кислота, ацетоуксусная кислота). Обнаружение (кетонурия): диабетическая кетонурия, лихорадка, голодание, низкоуглеводная диета. 
Креатинин. Понижение: почечная недостаточность. 
Амилаза. Повышение: острый панкреатит, рак поджелудочной железы, гепатит. 
Билирубин. Обнаружение в значительном количестве: гемолиз (аутоиммунная гемолитическая анемия, пироплазмоз, лептоспироз и т.д.), болезни печени, нарушение оттока желчи в кишечник, лихорадка, голодание. 
УробилиногенОбнаружение в значительном количестве: болезни печени, гемолиз, повышение активности кишечной микрофлоры. 
Отсутствие: нарушение оттока желчи в кишечник. 
РН. В норме моча собак имеет слабокислую или нейтральную реакцию. Щелочность мочи может свидетельствовать о растительной диете, даче щелочных препаратов, хронической инфекции мочевыводящих путей, метаболическом и респираторном алкалозе. 
Кислотность мочи повышается при мясной диете, усиленном распаде белков, даче кислотных препаратов, метаболическом и респираторном ацидозе. 
Гемоглобин. Обнаружение (гемоглобинурия): аутоиммунная гемолитическая анемия, сепсис, пироплазмоз, лептоспироз, отравление гемолитическими ядами (фенотиазин, метиленовый синий, препараты меди и свинца), инфузия несовместимой крови. 
Гемоглобинурию отличают от гематурии путем микроскопии осадка мочи. При гематурии в осадке мочи обнаруживается большое количество эритроцитов. Ложная гемоглобинурия может иметь место при гемолизе эритроцитов в слабо концентрированной и старой моче. 
Эритроциты. Обнаружение в большом количестве (гематурия): пиелонефрит, гломерулонефрит, геморрагический диатез, тромбоцитопения, отравление антикоагулянтами (зоокумарин, варфарин), инфаркт почки, травмы и опухоли мочеполовых органов, мочекаменная болезнь, воспалительные заболевания мочеполовых органов, диоктофимоз. 
Лейкоциты. Обнаружение в значительном количестве: воспалительные заболевания почек и мочевыводящих путей 
Цилиндры. Обнаружение в значительном количестве: поражение паренхимы почек, протеинурия (гиалиновые ц.), гематурия (эритроцитарные ц.), гемоглобинурия (пигментные ц.), пиелонефрит (лейкоцитарные ц.). 

 

КАЛ

 


Кал отбирают во время или непосредственно после дефекации, а у больших собак также из прямой кишки. Пробы лучше всего исследовать сразу после отбора, в противном случае кал помещают в холодильник при плюсовой температуре. Посуда должна быть чистой, а для бактериологического исследования - стерильной. Обычно кал исследуют на наличие яиц, онкосфер, члеников гельминтов, ооцист простейших, культивируют для обнаружения личинок стронгилоидов. 
Осмотром кала определяют его цвет, консистенцию, примеси. Черный цвет кала свидетельствует либо о мясной диете, либо о высоком желудочно-кишечном кровотечении. Примесь крови свидетельствует о кровотечении в нижних отделах кишечного тракта, однако при усиленной перистальтике кровь из тонкого отдела кишечника может выходить с калом неизмененная. Светлый стул свидетельствует о молочной диете. Характерный неприятный запах и розовый цвет - о парвовирусном энтерите. Слизь, пузырьки газа - о воспалении кишечника. Кал обычно исследуют на яйца гельминтов и ооцисты простейших методом флотации с растворами натрия хлорида и натрия нитрата. При микроскопии обращают внимание на перевариваемость корма. Добавление к калу раствора Люголя позволяет обнаружить не переваренный крахмал, а раствора Судана III - не переваренный жир.

 

КРОВЬ

 


Кровь отбирают из головной вены предплечья или латеральной подкожной вены голени. Пункцию проводят одноразовым шприцом вместимостью 5-10 мл, натощак, после 12-часовой голодной диеты. Для предотвращения гемолиза и загрязнения пробы используемая посуда должна быть совершенно чистой, манипулировать кровью следует крайне осторожно, переливать кровь по стенке пробирки без напора, создаваемого шприцом. 
Поскольку кровь в течение нескольких минут свертывается, ее необходимо либо использовать непосредственно после взятия, либо оставить для получения сыворотки, либо смешать с антикоагулянтом. 
Применяют следующие антикоагулянты: гепарин (5-10 ЕД/мл крови) - для получения плазмы, ЭДТА-натрий (0,5 мл 1,5 % раствора на 10 мл крови) - для получения плазмы и гематологических исследований, натрия цитрат (1 мл 3,8 % раствора на 9 мл крови) - для получения плазмы, определения протромбинового времени, гематологических исследований. 
Для гематологических исследований используют нативную кровь, а также стабилизированную натрия цитратом или ЭДТА. Гепарин для этих целей не пригоден. 
Кровь используют по возможности сразу после взятия. Подсчет количества форменных элементов и концентрации гемоглобина допускается в течение суток. Разведение крови антикоагулянтом учитывают в дальнейших расчетах. 
Для биохимических и серологических исследований используют сыворотку и плазму крови. Сыворотку получают следующим образом: кровь без коагулянта ставят в пробирке в теплое место (37-38 градусов Цельсия); после сворачивания крови ее обводят по краю пробирки длинной иглой, а через несколько часов сыворотку отсасывают пипеткой и сохраняют в холодильнике. Большее количество сыворотки можно получить после центрифугирования. Плазму получают центрифугированием при 2-3 тысячах оборотов в минуту стабилизированной антикоагулянтами крови. Плазма отличается от сыворотки наличием фибриногена и антикоагулянта. Для определения большинства показателей более пригодна сыворотка крови. Для биохимических исследований чаще используют сыворотку, которую получают центрифугированием с одновременным охлаждением, и безбелковый фильтрат крови, чтобы фактор времени и температуры не исказил биохимические показатели. 

 

СПЕРМА

 


Сперму собирают методом искусственной вагины и путем мастурбации. Необходимо, чтобы самец предварительно пообщался с сукой, находящейся в охоте. Эякулят кобеля имеет три фракции: секрет уретральных желез, сперма и секрет предстательной железы. 
Общий объем эякулята от 1 до 20 мл. Каждая фракция может быть собрана отдельно, причем для определения качества спермы достаточно собрать первую и вторую фракции в течение первых 5 минут эякуляции, которая продолжается всего около 30 минут. В сперме определяют двигательную активность спермиев, количество спермиев в эякуляте (с помощью камеры Горяева при разведении в 100 раз), наличие измененных спермиев. При взятии пробы в стерильную посуду можно провести микробиологический анализ спермы, в том числе секрета предстательной железы. 

 

СОСКОБЫ КОЖИ

 


Соскобы кожи делают для обнаружения клещей Demodex, Sarcoptes, Notoedres, Otodectes, вызывающих соответственно демодекоз, зудневую и ушную чесотку, а также их личинок и яиц. Для этого острым предметом, лучше скальпелем, делают глубокие соскобы пораженных участков до появления крови. При демодекозе исследуют, кроме того, содержимое пустул. Материал помещают в капельку масла и микроскопируют при малом увеличении. Идентифицируют паразитов по морфологическим признакам. Соскоб кожи с шерстью используют для микроскопического анализа на грибки; при этом его обрабатывают 10 % раствором щелочи. 

 

КОСТНЫЙ МОЗГ

 


Пробы костного мозга у собак отбирают с целью исследования клеточного состава, на предмет диагностики гемобластозов, анемий, других заболеваний системы крови, а также для диагностики остеомиелита. Собаке дают наркоз или применяют комбинацию транквилизатора с местной анестезией. Выстригают шерсть в месте предполагаемой пункции (подвздошная кость или проксимальный конец бедренной кости), обрабатывают антисептиком, вкалывают специальную иглу для костномозговых пункций, извлекают мандрен и аспирируют шприцом костный мозг, из которого изготавливают мазки или используют для микробиологического анализа. 

 

СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ

 


Спинномозговую жидкость используют для цитологического, биохимического и микробиологического анализа при заболеваниях центральной нервной системы. Кроме того, во время пункции атлантоокципитальной цистерны можно вводить в спинномозговую жидкость антибиотики. Техника операции: собаке дают легкий наркоз, фиксируют в боковом положении, выстригают шерсть в области прокола (посередине между затылочным бугром и краниальным крылом атланта), приводят голову к груди, вкалывают иглу длиной 5-10 см, одновременно оттягивая поршень шприца, до появления спинномозговой жидкости.